抗體將成為您在科研及生產(chǎn)中的得力助手
抗體孵育一抗:
A. 先將需要檢測的抗體準備好,并決定好它們的稀釋度。
B. 配好5%的Milk(TBST溶解),按要求稀釋好抗體,注意,如需高比例稀釋,最好采用梯度稀釋。
C. 將稀釋好的抗體和膜一起孵育,一般采用RT 1小時,可根據(jù)抗體量和膜上抗原量適當延長或縮短時間。
注意:為了便于后面分析結果,我們一般會選用已確定分子量大小而且純度高的抗體作為marker與一抗同時孵育。
抗體pH的應用范圍及選擇:
抗原修復液的pH非常重要,有效的抗原修復pH要比修復液的化學成分更重要,同樣的修復液隨著pH的升高染色的強度逐漸增強,但最佳pH范圍為6.0-10.0,目前大家公認的最好的抗原修復液是pH6.0的檸檬酸鹽緩沖液和pH8.0的EDTA緩沖液,作為通用修復液堿性pH的修復液要比酸性的有效,而對固定很長時間舊的存檔組織,酸性pH的修復液則優(yōu)于堿性的修復液。